曹雪涛团队发文：靶向炎症性疾病新方法

2024-06-29

本文为转换医学网原创，转载请注明出处。

作者：Jerry

简介:内溶酶作为一种高度组织化的系统，在维持免疫稳定方面发挥着至关重要的作用。然而，调节内溶酶进展和后续炎症反应的机制尚不完全清楚。

6月21日，中国医学科学院/北京协和医学院曹雪涛和姜明红共同在期刊上《Advanced Science》上面的发表题为“E3” Ubiquitin Ligase RNF13 Suppresses TLR Lysosomal Degradation by Promoting LAMP-1 Proteasomal Degradation"研究论文，通过对103个E3泛素连接酶进行筛选和调节，发现溶酶RNF13抑制了溶酶体的完善，促进了巨噬细胞内部的Toll样受体(TLRs)引导性炎症反应。

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202309560

选题背景

像Toll一样受体(TLRs)受体识别是一种保守的模式。(PRRs)家庭，通过识别与病原菌相关的分子方法(PAMPs)，这是宿主抵抗外界病原菌损伤的第一道防线。同时，TLRs还可以识别与内部损伤相关的分子方法(DAMPs)，引起炎症反应的诱导。完全激活TLRs是宿主消灭入侵病原菌所必需的；但是，TLR的不适度激活或过度刺激会导致慢性炎症性疾病、癌症和自身免疫性疾病的发生和发展。所以，对TLR信号通道进行严格、准确的调控，对于在免疫防御和疾病中保持TLR信号的激活和抑制平衡尤为重要。

酸化是核内体完善的关键过程。Baf-A1等药物能中和核内体和溶酶体的pH，阻隔TLR信号传递。近几年来，一些内溶酶蛋白，如Lyst和Vps33B，在内溶酶完善动力学方面发挥了关键作用。另外，在巨噬细胞中，核心体/溶酶体晚期定位Rab7b作为TLR4或TLR9信号的负调节因子，通过增强TLRs向核心体/溶酶体的输送，促进TLRs的降解。但是，TLR活性对溶酶酸化和生物调节的具体机制尚未得到充分阐明。

研究进程

为全面研究RNF13的功效，研究人员首先对RNF13在不同小鼠原始免疫细胞中的表现进行了分析，发现RNF13主要表现在巨噬细胞中。值得注意的是，在TLRs配体LPS中、Poly I: C和CpG 李斯特菌的ODN或单核细胞生长(L. M.)经过处理，RNF13的蛋白质水平在时间依赖度下降，这与GEO数据库(GDS4419、在GDS2221中，RNF13可能在固有免疫系统中发挥重要作用。另外，RNF13表现为泛素化活性，因为在MG132处理之后，RNF13的表现明显增加，这表明RNF13是通过自泛素化降解的。

研究人员通过CRISPR-Cas9系统生成RNF13缺陷型(Rnf13)，以确定RNF13在促炎性细胞因子中的作用。−/−）RAW264.7细胞和RNF13表达平稳。（HA-RAW264.7细胞RNF13。Rnf13处理后3小时，−/−pHrodo在细胞中的免疫荧光强度明显增强，但在RNF13过表达细胞中却明显减弱，这表明RNF13抑制了内溶酶酸化。类似地，内体定位蛋白(例如EEA11)在溶酶体中表达增加(主要检测到RNF13)(例如、Rab5、当溶酶体定位蛋白(如Rab7b和LAMP-1，不含LAMP-2)表达增加时，Rab11和TLR4表达减少。另外，RNF13表示含有内体定位蛋白的亚细胞部分增加，而含有溶酶定位蛋白的亚细胞部分减少，这表明溶酶RNF13抑制了内溶酶体的进程。

研究人员使用Rnf13敲除(Rnf13)，以便更详细地讨论RNF13的功效。−/−）小鼠。Rnf13研究人员 / 和Rnf13−/−在小鼠腹膜巨噬细胞中获取细胞，发现对LPS的反应、Poly I: Rnf13和CpG−/−IL-6和IFN巨噬细胞-β在Rnf13中，mRNA和蛋白质水平低于Rnf13 / 小鼠细胞。另外，分别使用LPS。、Poly I: 经过C和CpG处理后，通过表达RNF13的细胞在mRNA和蛋白质方面都比IL-6和IFN表达的细胞多。-β。综上所述，这些数据表明，RNF13在应对巨噬细胞激活内体TLRs方面具有免疫推动作用。